PROCESSO PARA OBTENÇÃO DE UM ANTICORPO MARCADO, MÉTODO PARA DIAGNÓSTICO DE LEPTOSPIROSE IN VITRO, USO, E, KIT PARA DETECÇÃO IN VITRO DA PRESENÇA DE CEPAS DE LEPTOSPIRA EM FLUIDOS BIOLÓGICOS
2 de julho de 2019
Inventores:
LARISSA DO RÊGO BARROS MATOS, LUIZ BEZERRA DE CARVALHO JÚNIOR; e PATRÍCIA ANTONIA ESTIMA ABREU DE ANIZ Tipo: Patentes
Núcleos:
NIT - Instituto Butantan
Temas:
Biotecnologia
Problema a ser resolvido:
A presente invenção encontra-se no campo da imunologia. A presente invenção se refere a um processo para obtenção de um anticorpo marcado que compreende as etapas de inoculação de uma cultura de Leptospira interrogans em coelho; extração de sangue de coelho inoculado com a cultura de Leptospira interrogans; purificação do anticorpo IgG anti-leptospira interrogans por meio de precipitação por ácido caprílico; diálise do anticorpo purificado; e conjugação do anticorpo purificado ao éster de acridina dimetil N-Hidroxisuccinamida (DMAE-NHS). A presente invenção se refere ainda a um método para diagnóstico de leptospirose in vitro, que consiste em contatar fluidos biológicos suspeitos de conter leptospiras com o anticorpo IgG anti-leptospira interrogans marcado tal como obtido pelo processo supracitado e detectar a ligação do anticorpo marcado à leptospira por quimiluminescência. A presente invenção se refere ainda ao uso do anticorpo marcado, tal como obtido pelo processo supracitado, para a detecção de leptospiras in vitro e a um kit para detecção in vitro da presença de cepas de leptospira em fluidos biológicos compreendendo o anticorpo IgG anti-leptospira interrogans associado ao éster de acridina DMAE-NHS. Inovação da Proposta:
No Brasil, a leptospirose apresenta surtos epidêmicos em períodos de chuva (Brasil, 2009; Pernambuco, 2012) e é encontrada com maior frequência nos estados de São Paulo, Rio de Janeiro, Rio Grande do Sul, Paraná, Pará, Bahia e Pernambuco. O desenvolvimento de vacinas para uso humano e veterinário é um grande desafio atualmente. As principais vacinas disponíveis são suspensões celulares mono ou polivalentes, inativadas por agentes químicos ou físicos, tais como formaldeído ou fenol e calor. Estas composições vacinais chamadas bacterinas apresentam várias deficiências, como a proteção restrita aos sorovares presentes na preparação, reatogenicidade associada aos contaminantes oriundos do processo de obtenção, como componentes do meio e lipopolissacarídeos, a não indução da imunidade em longo prazo, o que requer administração anual ou semestral. Neste sentido, tem sido proposto o desenvolvimento de uma vacina polivalente com o emprego de proteínas de membrana de leptospiras, que além de estarem envolvidas na interação das bactérias com as células do hospedeiro, são bastante conservadas entre as diferentes espécies e sorovares. Diferencial:
Nenhum documento do estado da técnica descreve ou sugere um método para detecção de leptospira in vitro utilizando-se um anticorpo IgG anti-leptospira purificado conjugado ao éster de acridina NHS-DMAE, o qual proporciona um método mais sensível para a detecção precoce de leptospiras em fluidos corporais. Status da Propriedade Intelectual:
Data do depósito do pedido de patente: 14 de maio de 2014 Depositante: FUNDAÇÃO BUTANTAN Pedido de exame: 16 de fevereiro de 2017 Status atual: Aguardando exame. O que buscamos:
A presente invenção propiciará vantagens significativas em relação ao método de diagnóstico de leptospirose existente no estado da técnica, proporcionando um método mais sensível para a detecção de leptospiras em fluidos corporais. O anticorpo policlonal IgG anti-leptospira purificado é conjugado ao éster de acridina NHS-DMAE, o que permite marcar leptospiras a partir da ligação específica antígeno-anticorpo, detectada por quimiluminescência, de forma mais rápida e mais sensível. A detecção de antígenos permite o diagnóstico precoce da leptospirose uma vez que para a detecção de anticorpos é necessária uma resposta imune. O diagnóstico precoce de leptospirose é de extrema importância já que o diagnóstico tardio da mesma é ainda uma das principais causas do grande número de óbitos por esta doença, devido à inespecificidade dos sintomas. Mais Informações:
Link
LARISSA DO RÊGO BARROS MATOS, LUIZ BEZERRA DE CARVALHO JÚNIOR; e PATRÍCIA ANTONIA ESTIMA ABREU DE ANIZ Tipo: Patentes
Núcleos:
NIT - Instituto Butantan
Temas:
Biotecnologia
Problema a ser resolvido:
A presente invenção encontra-se no campo da imunologia. A presente invenção se refere a um processo para obtenção de um anticorpo marcado que compreende as etapas de inoculação de uma cultura de Leptospira interrogans em coelho; extração de sangue de coelho inoculado com a cultura de Leptospira interrogans; purificação do anticorpo IgG anti-leptospira interrogans por meio de precipitação por ácido caprílico; diálise do anticorpo purificado; e conjugação do anticorpo purificado ao éster de acridina dimetil N-Hidroxisuccinamida (DMAE-NHS). A presente invenção se refere ainda a um método para diagnóstico de leptospirose in vitro, que consiste em contatar fluidos biológicos suspeitos de conter leptospiras com o anticorpo IgG anti-leptospira interrogans marcado tal como obtido pelo processo supracitado e detectar a ligação do anticorpo marcado à leptospira por quimiluminescência. A presente invenção se refere ainda ao uso do anticorpo marcado, tal como obtido pelo processo supracitado, para a detecção de leptospiras in vitro e a um kit para detecção in vitro da presença de cepas de leptospira em fluidos biológicos compreendendo o anticorpo IgG anti-leptospira interrogans associado ao éster de acridina DMAE-NHS. Inovação da Proposta:
No Brasil, a leptospirose apresenta surtos epidêmicos em períodos de chuva (Brasil, 2009; Pernambuco, 2012) e é encontrada com maior frequência nos estados de São Paulo, Rio de Janeiro, Rio Grande do Sul, Paraná, Pará, Bahia e Pernambuco. O desenvolvimento de vacinas para uso humano e veterinário é um grande desafio atualmente. As principais vacinas disponíveis são suspensões celulares mono ou polivalentes, inativadas por agentes químicos ou físicos, tais como formaldeído ou fenol e calor. Estas composições vacinais chamadas bacterinas apresentam várias deficiências, como a proteção restrita aos sorovares presentes na preparação, reatogenicidade associada aos contaminantes oriundos do processo de obtenção, como componentes do meio e lipopolissacarídeos, a não indução da imunidade em longo prazo, o que requer administração anual ou semestral. Neste sentido, tem sido proposto o desenvolvimento de uma vacina polivalente com o emprego de proteínas de membrana de leptospiras, que além de estarem envolvidas na interação das bactérias com as células do hospedeiro, são bastante conservadas entre as diferentes espécies e sorovares. Diferencial:
Nenhum documento do estado da técnica descreve ou sugere um método para detecção de leptospira in vitro utilizando-se um anticorpo IgG anti-leptospira purificado conjugado ao éster de acridina NHS-DMAE, o qual proporciona um método mais sensível para a detecção precoce de leptospiras em fluidos corporais. Status da Propriedade Intelectual:
Data do depósito do pedido de patente: 14 de maio de 2014 Depositante: FUNDAÇÃO BUTANTAN Pedido de exame: 16 de fevereiro de 2017 Status atual: Aguardando exame. O que buscamos:
A presente invenção propiciará vantagens significativas em relação ao método de diagnóstico de leptospirose existente no estado da técnica, proporcionando um método mais sensível para a detecção de leptospiras em fluidos corporais. O anticorpo policlonal IgG anti-leptospira purificado é conjugado ao éster de acridina NHS-DMAE, o que permite marcar leptospiras a partir da ligação específica antígeno-anticorpo, detectada por quimiluminescência, de forma mais rápida e mais sensível. A detecção de antígenos permite o diagnóstico precoce da leptospirose uma vez que para a detecção de anticorpos é necessária uma resposta imune. O diagnóstico precoce de leptospirose é de extrema importância já que o diagnóstico tardio da mesma é ainda uma das principais causas do grande número de óbitos por esta doença, devido à inespecificidade dos sintomas. Mais Informações:
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